PL9fwy3NUQKwZ4sD4inWpJTEYsc71Y3xW0/2273_Su5A5E.srt

1
00:00:00,290 --> 00:00:03,370
Applicable to the enumeration of viable aerobic

2
00:00:03,370 --> 00:00:06,770
bacteria in food الهدف من هذه الطريقة هي 

3
00:00:06,770 --> 00:00:10,090
الطريقة اللي هي من  الـ Aerobic Colony Count أو 

4
00:00:10,090 --> 00:00:14,570
مسميها Total Viable Count الهدف منها enumeration

5
00:00:14,570 --> 00:00:20,930
عدّ لبكتيريا بتكون حية وهوائية بتعتمد على وجود ال

6
00:00:20,930 --> 00:00:25,700
oxygen في النمو، رح نعدّها في الـ food سواء كانت هي 

7
00:00:25,700 --> 00:00:28,960
البكتيريا psychrophilic إيش هي psychrophilic؟ محبة

8
00:00:28,960 --> 00:00:31,980
لدرجات الحرارة اللي منخفضة أو محبة للبرودة

9
00:00:31,980 --> 00:00:35,680
mesophilic محبة لدرجات الحرارة المعتدلة، و

10
00:00:35,680 --> 00:00:40,300
thermophilic محبة لدرجات الحرارة العالية The

11
00:00:40,300 --> 00:00:44,280
Aerobic Colony Count الـ ACC بتقدر، بتستطيع تقدير number

12
00:00:44,280 --> 00:00:47,580
of viable aerobic bacteria سواء كانت بالجرام أو 

13
00:00:47,580 --> 00:00:51,440
بالمللي حسب الحالة الفيزيائية للـ product، a portion

14
00:00:51,440 --> 00:00:54,360
of the product بناخد جزء من الـ sample اللي هي عبارة

15
00:00:54,360 --> 00:00:57,920
عن الـ analytical unit، بعدين بنعمل سلسلة من التخفيفات

16
00:00:57,920 --> 00:01:02,630
بروحي آخد من كل تخفيف وبعمله is mixed with a 

17
00:01:02,630 --> 00:01:06,770
specified agar medium بروحي أزرعه على الـ agar، و

18
00:01:06,770 --> 00:01:10,510
incubated under a specific condition of time and

19
00:01:10,510 --> 00:01:15,010
temperature بحطه في الـ incubator، بوفر للبكتيريا الـ

20
00:01:15,010 --> 00:01:18,310
time والـ temperature حسب نوع البكتيريا اللي بدي إياها

21
00:01:18,310 --> 00:01:21,530
تنمو، it's assumed that each viable aerobic

22
00:01:21,530 --> 00:01:25,370
bacteria will multiply under these conditions بقول

23
00:01:25,370 --> 00:01:28,670
لي، فبالتالي البكتيريا اللي كانت بالأساس ما بقدر

24
00:01:28,670 --> 00:01:31,690
أشوفها بالـ naked eye، لما وبوفرلها الظروف هي من 

25
00:01:31,690 --> 00:01:34,850
ناحية الـ time والـ temperature، رح يصير بإمكانها

26
00:01:34,850 --> 00:01:38,910
multiplication تتضاعف بالـ binary fission، و تنقسم 

27
00:01:38,910 --> 00:01:43,430
أكثر و تظهر على شكل visible colonies، بقدر أشوفها

28
00:01:43,430 --> 00:01:47,890
بالـ naked eye، وبالتالي بعدها which can be counted

29
00:01:49,640 --> 00:01:52,920
الـ Psychrophilic bacteria هي البكتيريا المحبة 

30
00:01:52,920 --> 00:01:58,220
للبرودة which grows optimally at or below 15°C which

31
00:01:58,220 --> 00:02:01,380
has an upper limit أقصى درجة حرارة ممكن أنها تنمو

32
00:02:01,380 --> 00:02:06,280
عليها هي 20°C وأقل درجة حرارة has a lower limit of

33
00:02:06,280 --> 00:02:10,730
growth 0°C يعني ده هي البكتيريا بتنمو على درجة حرارة

34
00:02:10,730 --> 00:02:17,310
من 0°C لـ 20°C، لكن أفضل نمو لإلها على درجة حرارة 15°C، الـ

35
00:02:17,310 --> 00:02:20,910
range من 0°C لـ 20°C، والأفضل على درجة حرارة 15°C، الـ

36
00:02:20,910 --> 00:02:23,930
Mesophilic bacteria an organism whose optimum

37
00:02:23,930 --> 00:02:26,950
growth temperature أفضل نمو لإلها بتكون على درجة

38
00:02:26,950 --> 00:02:31,370
حرارة 37°C أو 30°C، لكنها بتنمو في الـ range من 20°C لـ 45°C

39
00:02:33,210 --> 00:02:35,670
الـ Thermophilic Bacteria هي البكتيريا المحبة

40
00:02:35,670 --> 00:02:39,550
للحرارة المرتفعة، فبتنمو بِمعدّل أعلى من 45°C 

41
00:02:39,550 --> 00:02:46,290
لكنها بتفضل الـ 55°C، هاي شغلات ممكن نحتاجها

42
00:02:46,290 --> 00:02:50,170
في المعمل، رح نحتاج لـ Colony Counting Device هذا

43
00:02:50,170 --> 00:02:53,750
جهاز بيعّد الـ Colonies، لكن إحنا في ما عملنا هنعدّ

44
00:02:53,750 --> 00:02:57,270
باستخدام الـ naked eye، يعني إحنا مش بحاجة للجهاز

45
00:02:57,270 --> 00:03:01,750
هذا، لـ Stomacher أو لـ Blender، جهاز بنستخدمه لطحن

46
00:03:01,750 --> 00:03:08,390
الطعام، بنحولّه من solid إلى liquid، الـ pH meter بيعمل 

47
00:03:08,390 --> 00:03:14,810
على ضبط الـ pH، الـ HCl والـ NaOH هدول حمض 

48
00:03:14,810 --> 00:03:18,930
وقاعدة، بيقول لي أول ما بيجي لي الـ food بروح أقيس الـ

49
00:03:18,930 --> 00:03:23,430
pH لإله، لو كان حامضي الـ food، لو كان حامضي بروح

50
00:03:23,430 --> 00:03:27,850
أضيف عليه NaOH، فبالتالي بظلّ أضيف أضيف لعند ما

51
00:03:27,850 --> 00:03:32,840
يصير الوسط متعادل، الـ food متعادل، لو كان الـ Food

52
00:03:32,840 --> 00:03:39,040
جييني قاعدي بضيف عليه HCl لعند ما يتعادل، طيب ليش 

53
00:03:39,040 --> 00:03:44,260
لازم أضبط الـ pH للـ Food؟ بيقول لي في وسط اسمه الـ

54
00:03:44,260 --> 00:03:48,220
MSA، هاد رح تأخذوه بالتفصيل في المعمل القادم إن شاء 

55
00:03:48,220 --> 00:03:54,760
الله، MSA Media اسمها Mannitol Salt Agar تمام؟ هاد

56
00:03:54,760 --> 00:04:00,320
وسط خاص بنمي فيه البكتيريا لـ Staphylococcus aureus، اسم الوسط 

57
00:04:00,320 --> 00:04:01,260
MSA

58
00:04:04,970 --> 00:04:09,710
الـ Media هي من ضمن مكوناتها pH Indicator، فالـ pH

59
00:04:09,710 --> 00:04:18,390
Indicator اسمه Phenol Red، لما الـ pH يكون حامضي بيعطيني لون 

60
00:04:18,390 --> 00:04:23,530
أصفر، لو كان الـ pH alkaline أو قاعدي بيعطيني لون

61
00:04:23,530 --> 00:04:29,330
أحمر، تمام، الـ Staphylococcus aureus راح تيجي وتنمو على هذا 

62
00:04:29,330 --> 00:04:34,070
الوسط اللي لونه بالأساس بيكون beige، طبعا البكتيريا

63
00:04:34,070 --> 00:04:38,170
أثناء نموها بتستهلك من السكر الموجود في الـ media

64
00:04:38,170 --> 00:04:43,170
بتعمله fermentation بتطلع acid، fermentation للسكر

65
00:04:43,170 --> 00:04:48,530
بيعطي acid، acid يعني pH منخفضة، يعني هيصير الـ Phenol 

66
00:04:48,530 --> 00:04:54,770
Red، أو الـ pH هيكون acidic، acidic هيعطي لون لون 

67
00:04:54,770 --> 00:04:58,230
أصفر، ناتج عن شو؟ إن البكتيريا عملت fermentation

68
00:04:58,230 --> 00:05:02,710
فطلعت acid، فمن اللون الأصفر بقدر أعرف أن هذه

69
00:05:02,710 --> 00:05:06,330
البكتيريا بتطلع acid، طيب، فيه معلومات كنت عاملة تضبط

70
00:05:06,330 --> 00:05:09,990
الـ pH للـ food وكان مثلا جاينة أنه عينة، أنه مثلا

71
00:05:09,990 --> 00:05:14,270
لبن، واللبن عينة، هاد حامضي، فبالتالي الـ pH

72
00:05:14,270 --> 00:05:17,770
Indicator هيتحسس لوجود الحمض اللي بالـ food، و

73
00:05:17,770 --> 00:05:22,110
هيظهر اللون أصفر، إحنا هنفكر أن هذا الأصفر ناتج إن

74
00:05:22,110 --> 00:05:25,630
فيه بكتيريا Staphylococcus aureus عملت fermentation للسكر

75
00:05:25,630 --> 00:05:30,250
فطلعت acid، لكن لأ، هي الـ acid جايه من الـ food، وهيك

76
00:05:30,250 --> 00:05:38,230
هيعطيني رقم Colonies أكثر من المتوقع، حتى 

77
00:05:38,230 --> 00:05:43,070
لو كانت نامية أيّ بكتيريا غير الـ Staphylococcus aureus وهي 

78
00:05:43,070 --> 00:05:47,590
البكتيريا بطبيعتها ما بتعمل fermentation للسكر

79
00:05:47,590 --> 00:05:52,050
فبالتالي هيظهر لون الـ Colonies لهذه البكتيريا أصفر

80
00:05:52,050 --> 00:05:55,950
ليش؟ لأن فيه acid أتي من الـ food، فرح أعدّ هذه الـ

81
00:05:55,950 --> 00:05:58,590
Colonies على أنها من ضمن الـ Staphylococcus aureus، وهذا أساسًا 

82
00:05:58,590 --> 00:06:04,440
خطأ، البروسيجر بتحدّد أيّ نوع من البكتيريا الهوائية 

83
00:06:04,440 --> 00:06:08,700
اللي بنستخدمها لازم أول شيء نعرف شو نوع البكتيريا 

84
00:06:08,700 --> 00:06:12,880
اللي رح أنميها، ليش؟ مش هنعرف شو نوع الوسط اللي

85
00:06:12,880 --> 00:06:16,600
رح نستخدمه، فبنوّفر الوسط أو الـ media حسب البكتيريا 

86
00:06:16,600 --> 00:06:20,800
اللي رح أنميها، analyze each sample unit

87
00:06:20,800 --> 00:06:24,380
individually، كلّ عينة بتيجي لي بدي أتعامل معها بشكل 

88
00:06:24,380 --> 00:06:28,190
منفصل، the test shall be carried out in accordance

89
00:06:28,190 --> 00:06:30,630
with the following instructions، بدي أمشي على هي 

90
00:06:30,630 --> 00:06:34,050
التعليمات، handling of sample unit بالنسبة لها

91
00:06:34,050 --> 00:06:37,030
الـ التعامل مع الـ sample unit هي اللي بناخدها من الـ 

92
00:06:37,030 --> 00:06:41,130
lot during storage and transport أثناء عمليات

93
00:06:41,130 --> 00:06:46,970
النقل والتخزين بدي أتبع الشغلات هي، أول شيء بيقول لي 

94
00:06:46,970 --> 00:06:52,070
إن العينة المتلجة بحافظ عليها متلجة من صفر لـ

95
00:06:52,070 --> 00:06:56,150
أربعة، العينة المتلجة بحافظ عليها متلجة، وبخزنها

96
00:06:56,150 --> 00:07:00,330
درجة حرارة سالب عشرين، لو … لو بدي أشتغل حاليًا

97
00:07:00,330 --> 00:07:06,650
على عينة frozen مجمدة، شو بعمل؟ بدي أعملها thawing

98
00:07:06,650 --> 00:07:12,750
التسيح، يا إما بنزلها بالتلاجة من إثنين لخمسة، لو

99
00:07:12,750 --> 00:07:16,890
كنت مستعجلة عليها، بحطها في الـ water bath، درجة

100
00:07:16,890 --> 00:07:20,270
حرارة أقل من خمسة وربعين، ولمدة لا تزيد عن خمسة عشر 

101
00:07:20,270 --> 00:07:24,490
minute، Sample unit of a frozen product shall be

102
00:07:24,490 --> 00:07:28,190
kept frozen Though frozen sample in a refrigerator

103
00:07:28,190 --> 00:07:31,750
ممكن أحطها بالتلاجة، بتسيح، أو under time and

104
00:07:31,750 --> 00:07:36,090
temperature أو تحت time و temperature معينين which

105
00:07:36,090 --> 00:07:40,270
prevent microbial growth or death، درجة هيدا الـ

106
00:07:40,270 --> 00:07:43,910
water bath بأطبطها بحيث أنها ما بتعمل نمو أو قتل

107
00:07:43,910 --> 00:07:46,470
للـ microorganism، فبتحافظ على العدد زي ما هو

108
00:07:46,470 --> 00:07:50,330
analyze sample unit as soon as possible after

109
00:07:50,330 --> 00:07:52,930
receipt in the laboratory، بدي أحلّل الـ sample 

110
00:07:52,930 --> 00:07:57,510
بمجرد ما تصِل للمعمل، بالنسبة لتحضير الـ media زي ما

111
00:07:57,510 --> 00:08:00,490
عملنا في المعمل الماضي، بدنا نحضر الـ media كيف؟ 

112
00:08:00,490 --> 00:08:03,750
بأجيب أيّ Media بدي إياها مثلا للـ Nutrient Agar، بتطلع

113
00:08:03,750 --> 00:08:07,150
على الـ instructions من برا، قداش بحتاج قلوات من الـ

114
00:08:07,150 --> 00:08:10,030
powder، قداش بحتاج عليها من distilled water، بحطّهم

115
00:08:10,030 --> 00:08:12,390
مع بعض في الـ flask، وبعدين بحطّهم على الـ hot 

116
00:08:12,390 --> 00:08:15,630
plate، إذا بحتاج لتعقيم، بَعقّمهم بالـ Autoclave

117
00:08:15,630 --> 00:08:19,850
تمام، بعد هيك بقصبهم and dispense in appropriate 

118
00:08:19,850 --> 00:08:25,200
quantities sterilized بصّبهم في الأطباق، قلنا بنصبّ 

119
00:08:25,200 --> 00:08:29,660
من 15 ل 20 سم مكعب أو ملي لتر، A clean surface of

120
00:08:29,660 --> 00:08:32,440
working area with a suitable disinfectant، بدي أعقّم 

121
00:08:32,440 --> 00:08:36,220
المنطقة اللي رح أشتغل عليها باستخدام disinfectant

122
00:08:36,220 --> 00:08:40,640
اللي هو مادة بتعمل على قتل فقط الـ pathogenic bacteria

123
00:08:40,640 --> 00:08:45,140
مش جميع أنواع الـ microorganisms، Clearly marked

124
00:08:45,140 --> 00:08:49,830
deduplicate Petri dishes باستخدام الـ marker راح أكتب

125
00:08:49,830 --> 00:08:53,470
على كلّ طبق التخفيف لإله، بيقول لي ممكن نستخدم 

126
00:08:53,470 --> 00:08:59,350
duplicate لكلّ تخفيف، مثلا للـ tube الأول كان تخفيفه

127
00:08:59,350 --> 00:09:03,230
عشرة أس سالب اثنين، بقدر أستخدم له هاد طبقين، الطبق

128
00:09:03,230 --> 00:09:06,870
الأول بحط عليه 100 μl، الطبق الثاني 100 μl، 

129
00:09:06,870 --> 00:09:13,580
أما الأثنين بحطهم في الـ incubator، بعد 24 ساعة بعد

130
00:09:13,580 --> 00:09:16,760
الـ QnA في الأثنين، وبأخذ الـ average لإلهم، لو 

131
00:09:16,760 --> 00:09:21,660
كانت واقعة ضمن الـ range من 25 لـ 250 بعوّض في

132
00:09:21,660 --> 00:09:25,020
القانون، الـ concentration بيساوي أنا على SVD، أو 

133
00:09:25,020 --> 00:09:29,920
ممكن أعمل duplicate لكل تخفيف، واحد بحطه بالتلاجة 

134
00:09:29,920 --> 00:09:33,840
والتاني بحطه بالـ incubator، ليش هي؟ مش هي الـ

135
00:09:33,840 --> 00:09:37,180
interfering particles أو اللي إحنا بدنا نمشي عليها

136
00:09:37,180 --> 00:09:41,500
بس بعمل طبق واحد لكل تخفيف بحطه في الـ incubator، و

137
00:09:41,500 --> 00:09:45,660
بعد عدّ الـ colonies لو كانت واقعة ضمن الـ range بعوّض في

138
00:09:45,660 --> 00:09:50,500
القانون، بالنسبة لـ dilution preparation of

139
00:09:50,500 --> 00:09:53,800
dilutions هم بيحكوا لي بدي نحضر واحد و عشرة بيبتون 

140
00:09:53,800 --> 00:09:56,560
water diluent لكن إحنا راح نشتغل عليها في ما عملنا





141
00:09:56,560 --> 00:10:01,900
normal saline 85 من 100% بقول لي to ensure truly

142
00:10:04,510 --> 00:10:08,030
مشان أضمن أنه أخذ تعيين ممثل من الـ analytical unit

143
00:10:08,030 --> 00:10:12,270
لازم أعمل agitation للـ sample unit until the

144
00:10:12,270 --> 00:10:16,110
content are homogeneous لو كانت solid بحطها في الـ

145
00:10:16,110 --> 00:10:22,570
blender لو كانت liquid بعملها mix If the sample

146
00:10:22,570 --> 00:10:26,150
unit is solid لو كانت الـ sample unit عندي solid زي

147
00:10:26,150 --> 00:10:30,790
مثلا طحين، لحمة، سلطة، شو بعمل؟ obtain the

148
00:10:30,790 --> 00:10:34,150
analytical unit by taking a portion from several

149
00:10:34,150 --> 00:10:37,350
locations within the sample unit راح أخد من كل

150
00:10:37,350 --> 00:10:44,350
مكان، من فوق، من تحت، من الوسط، من الأطراف بيقول

151
00:10:44,350 --> 00:10:48,070
لي prepare واحد لعشرة dilutions of food كيف بقدر

152
00:10:48,070 --> 00:10:52,710
أحضر واحد لعشرة؟ ممكن باستخدام 25 جرام من الـ sample و

153
00:10:52,710 --> 00:10:59,650
225 مل من الـ diluent أو ممكن 11 جرام من الـ sample

154
00:10:59,650 --> 00:11:04,310
و 99 مل من الـ diluent أو 10 جرام sample و 90 مل من

155
00:11:04,310 --> 00:11:08,770
الـ diluent بغض النظر عن الكميات بقدر أحضر تخفيف 1

156
00:11:08,770 --> 00:11:13,210
ل 10 الـ slide اللي بعده هاي مش مهمة لكن المقصود

157
00:11:13,210 --> 00:11:16,910
فيها إن إحنا بنبدأ بتخفيف 1 ل 10 و بدنا نمشي

158
00:11:16,910 --> 00:11:22,650
على مضاعفة العشرة 1 ل 10، 1 ل 100، 1 ل 1000، وهكذا

159
00:11:23,930 --> 00:11:27,010
Check the pH of the food suspension بيقول لي لازم

160
00:11:27,010 --> 00:11:30,210
أنّه انحافظ على الـ pH للـ food بحيث أنّه تكون

161
00:11:30,210 --> 00:11:35,690
واقعة من خمسة ونصف لسبعة فاصلة ستة طيب لو كان الـ pH

162
00:11:35,690 --> 00:11:39,350
للـ food لما قستّه بالـ pH Meter كان عندي مثلا أربعة

163
00:11:39,350 --> 00:11:42,930
أربعة يعني هاتش مالها acidic بدي أضيف عليها NaOH

164
00:11:42,930 --> 00:11:47,490
بظن أضيف لعند ما يصل عندي ل الـ range الموجود هذا

165
00:11:47,490 --> 00:11:50,850
هو الـ range بحيث أنّه يكون فيه الـ food متعادل لو كان

166
00:11:50,850 --> 00:11:54,510
عندي الـ food الـ pH لإله ثمانية شو بعمل؟ بضيف HCl

167
00:11:54,510 --> 00:11:58,310
بحيث أنّه ينزل الـ pH للـ food و يصير ضمن الـ range

168
00:11:58,310 --> 00:12:02,710
prepare succeeding decimal dilution يعني بدي أعمل

169
00:12:02,870 --> 00:12:08,130
serial dilution كذا تخفيف as required using a

170
00:12:08,130 --> 00:12:11,370
separate sterile pipet for making H-transfer رح

171
00:12:11,370 --> 00:12:15,190
أستخدم بيبت و أستخدم معاه tip معقم و رح آخد من كل

172
00:12:15,190 --> 00:12:19,770
tube واحد مل للـ tube اللي بعده mix واحد مل وهكذا

173
00:12:20,960 --> 00:12:24,400
Shake all dilutions immediately prior to making a

174
00:12:24,400 --> 00:12:27,660
transfer يعني أنا كنت عمال بشتغل على أول tube

175
00:12:27,660 --> 00:12:32,880
فعملت له mix روحت أخدت منه واحد مل وبعدين للـ tube

176
00:12:32,880 --> 00:12:36,460
التاني واحد مل وهكذا فطول ما أنا هيك على الـ tube

177
00:12:36,460 --> 00:12:40,060
الأول بدي أجي حاليا آخد 100 micro من أول تخفيف

178
00:12:40,060 --> 00:12:43,680
أحطه على الطبق طبعا أنا أستنيت عليه فترة لعين ما

179
00:12:43,680 --> 00:12:48,420
أخلص باقي الـ tubes معناه للكلام أنّه البكتيريا نسلت

180
00:12:48,420 --> 00:12:53,180
تحتصار عندي التوزيع مش متساوي فلازم أعمل vortex

181
00:12:53,180 --> 00:12:58,840
كمان مرة، mix بعمل mix وبعدين باخد 100 micro و

182
00:12:58,840 --> 00:13:02,260
بأزرع على الطبق ليش؟ to ensure uniform

183
00:13:02,260 --> 00:13:06,780
distribution of the microorganism present الشكل

184
00:13:06,780 --> 00:13:10,500
هذا بيقولك كيف لما يكون في عندي أكتر من تخفيف مثلا

185
00:13:10,500 --> 00:13:14,440
1 ل 10، 1 ل 100، 1 ل 1000، شو بعمل؟ باخد 100

186
00:13:14,440 --> 00:13:17,900
microliter من كل .. من كل tube بحطه على الطبق

187
00:13:19,520 --> 00:13:23,780
بزرعه بستنى عليه شوية بعدين بقلبه inverted

188
00:13:23,780 --> 00:13:27,340
position upside down بعدين بحطه في الـ incubator 24

189
00:13:27,340 --> 00:13:32,900
ساعة لمدة على .. على 37 بعد الـ colonies لاحظوا أن أول

190
00:13:32,900 --> 00:13:37,730
tubeين كان عندي الـ colonies كتير كبيرة مليانة بدي أجي

191
00:13:37,730 --> 00:13:41,990
أعدّها هلاحظ أنّه عددها already أكثر من 250 فالنتيجة

192
00:13:41,990 --> 00:13:45,070
إليهم هتكون too numerous to count ما بقدر أستخدم

193
00:13:45,070 --> 00:13:51,090
القانون عليهم الـ 2 بالتالي لما عدّوها 65 هي واقعة

194
00:13:51,090 --> 00:13:55,730
ضمن الـ range من 25 إلى 250 وبالتالي بقدر أعوض في

195
00:13:55,730 --> 00:14:02,280
القانون الـ 4 والخامس 6 colonies و 0 هدول بنسميهم

196
00:14:02,280 --> 00:14:07,440
negative أو too few to count، TFTC ما بقدر أعوض في

197
00:14:07,440 --> 00:14:13,980
القانون بدي أزرع حاليا لـ plating يعني بدي آخد من

198
00:14:13,980 --> 00:14:18,360
الـ tube و أحط على الطبق agitate each dilution

199
00:14:18,360 --> 00:14:22,560
bottle to resuspend material that may have settled

200
00:14:22,560 --> 00:14:25,780
out during preparation برضه بروح أحط على الـ vortex

201
00:14:25,780 --> 00:14:31,110
تاني لحتى آخد الـ microorganisms و أحطها على الـ plates لحتى

202
00:14:31,110 --> 00:14:36,000
يصير uniform distribution of microorganism شو بعمل

203
00:14:36,000 --> 00:14:39,400
بعد هي خلاص فزرعت بحطهم في الـ incubator لكن

204
00:14:39,400 --> 00:14:44,600
inverted position مقلبين الغطايا بدها تكون للأسفل

205
00:14:44,600 --> 00:14:48,280
Incubation temperature is dependent on the growth

206
00:14:48,280 --> 00:14:50,740
temperature requirement of the target organism

207
00:14:50,740 --> 00:14:54,160
بيقول لي درجة الحرارة والـ time أنا بتحكم فيهم

208
00:14:54,160 --> 00:14:58,080
بأضبطهم حسب نوع البكتيريا اللي بدي أزرعها هل هي

209
00:14:58,080 --> 00:15:01,680
psychrophilic محب لدرجة حرارة منخفضة mesophilic

210
00:15:01,680 --> 00:15:06,480
معتدلة thermophilic عالية avoid a crowding or

211
00:15:06,480 --> 00:15:10,180
excessive stacking of plates بدي أمنع أن يكون عندي

212
00:15:10,180 --> 00:15:14,040
الأطباق فوق بعض بشكل كبير أو يكون في عندي ازدحام

213
00:15:14,040 --> 00:15:18,480
في الـ incubator ليش؟ لأن هذا الشيء مش راح يسمح أنّه

214
00:15:18,480 --> 00:15:23,520
بتوزيع منتظم للحرارة على كل الأطباق فبدي أراعي أنّه

215
00:15:23,520 --> 00:15:27,600
ما تكون الأطباق مكدسة فوق بعض وأكتر من الـ tubes

216
00:15:27,600 --> 00:15:32,430
أكتر من الـ plates بالنسبة اللي بيعدّ الـ colonies

217
00:15:32,430 --> 00:15:35,850
count colonies promptly after the incubation بيجد

218
00:15:35,850 --> 00:15:39,710
okay أنّه هي البكتيريا بتحتاج 24 ساعة خلاص خلصت الـ

219
00:15:39,710 --> 00:15:44,230
24 ساعة مباشرة بروح بعد الـ colonies ما بسمح بوقت

220
00:15:44,230 --> 00:15:50,230
إضافي if possible select plates with من 25 ل 250

221
00:15:50,230 --> 00:15:53,950
colonies حتى بما فيها يعني الـ colonies اللي بتكون

222
00:15:53,950 --> 00:15:57,250
pinpoint اللي صغيرة كتير زي رأس الدبوس هاي برضه

223
00:15:57,250 --> 00:16:00,670
كمان بعدها إيه في plates contain colonies which

224
00:16:00,670 --> 00:16:05,290
spread؟ بقول لي لو كان عندي الطبق فيه colonies موزع

225
00:16:05,290 --> 00:16:08,270
بالتساوي أو بانتظام على طول الطبق يعني مش أن يكون

226
00:16:08,270 --> 00:16:12,140
في عندي فيه جهة مكدس فيها الـ colonies جهة تانية وفاضية

227
00:16:12,140 --> 00:16:15,840
لو كانت الـ colonies موزعة بالتساوي و بانتظام في جميع

228
00:16:15,840 --> 00:16:19,140
الطبق شو بعمل Select representative portion of the

229
00:16:19,140 --> 00:16:21,940
plate free from spreader if possible and count

230
00:16:21,940 --> 00:16:26,060
the colonies in this area بقى شوف بقسم الـ .. بقسم

231
00:16:26,060 --> 00:16:30,440
الـ plate عندي إلى أربع أرباع باخد بس ربع واحد بعيد

232
00:16:30,440 --> 00:16:33,960
قديش فيه colonies وبالتالي بقدره في أربعة وهيك بصير

233
00:16:33,960 --> 00:16:37,360
زي كإني عديت الـ colonies اللي في الطبق ككل The total

234
00:16:37,360 --> 00:16:40,400
count of the entire plate is estimated by شو بعمل

235
00:16:40,400 --> 00:16:44,800
multiplying the count بدي أضرب قداش عندي العدد في

236
00:16:44,800 --> 00:16:48,020
المنطقة اللي أنا عديتها في أربعة على سبيل المثال

237
00:16:48,020 --> 00:16:51,480
بقول لي لو طلع منك لو طلع بس 30 colony في ربع

238
00:16:51,480 --> 00:16:55,560
واحد بدي في كل الطبق 30 في 4 بطلع 120

239
00:16:55,560 --> 00:16:59,060
colony العدد هذا واقع ضمن الـ range

240
00:16:59,060 --> 00:17:03,850
وبالتالي بطبق القانون differentiation of colonies

241
00:17:03,850 --> 00:17:07,090
from interfering particles كيف بدي أميز هل هاي

242
00:17:07,090 --> 00:17:10,470
اللي عندي colonies أو هل هي interfering particles

243
00:17:10,470 --> 00:17:13,590
بيقول لي الـ food particles أو الـ interfering

244
00:17:13,590 --> 00:17:16,970
particles زي مثلا اللحمة لما ضال في منها جزيئات مش

245
00:17:16,970 --> 00:17:21,390
ذائبة أو مثلا الـ milk powder البودرة often

246
00:17:21,390 --> 00:17:24,050
interfere with the enumeration of the colonies هيصير

247
00:17:24,050 --> 00:17:28,520
فيه تداخل أو في لبس بين عدّ الـ colonies وعدّ

248
00:17:28,520 --> 00:17:32,460
الـ interfering particles الكفة دي أتخلص منها عن

249
00:17:32,460 --> 00:17:36,720
طريق by making one extra plate of each dilution

250
00:17:36,720 --> 00:17:41,220
لكل تخفيف بحط له كمان طبق تاني وهذا الطبق التاني قلنا

251
00:17:41,220 --> 00:17:45,840
بحطّه في التلاجة كـ control بشوف قداش طالع عندي شكل

252
00:17:45,840 --> 00:17:50,620
قداش طالع عندي عدد الـ interfering particles وشكلها

253
00:17:50,620 --> 00:17:54,820
وموقعها و بقارنها مع موقعها اللي في الطبق اللي في

254
00:17:54,820 --> 00:17:59,430
الـ incubator Alternatively ممكن طريقة تانية After

255
00:17:59,430 --> 00:18:03,410
incubation بعد ما أطلع الطبق من الـ incubator بدي

256
00:18:03,410 --> 00:18:08,270
أجي أعدّ شو بعمل؟ قبل اللي أعدّ بحط 2 مل TTC

257
00:18:08,270 --> 00:18:12,330
Triphenyl Tetrazolium Chloride المادة دي هي بحط

258
00:18:12,330 --> 00:18:18,740
منها 2 مل على الطبق ككل و بوزعها على الطبق Gently

259
00:18:18,740 --> 00:18:22,240
rock plate from side to side يعني بدي أحرك الطبق

260
00:18:22,240 --> 00:18:26,120
لحتى إنّه هاي المادة تتوزع على كل الطبق اللي عندي

261
00:18:26,120 --> 00:18:32,580
بعد هيك بخليها على الـ room temperature لمدة 3

262
00:18:32,580 --> 00:18:36,100
ساعات حطيتها okay بحطها على الـ room temperature و

263
00:18:36,100 --> 00:18:41,600
بقلبها بعد كده بدي أطلع على لون الـ colonies لو كان

264
00:18:41,600 --> 00:18:44,640
لو كان لونها أحمر معناته هاي colony أو إنّه

265
00:18:44,640 --> 00:18:48,360
بكتيريا لو ما تلوّنت معناته interfering particle أيش

266
00:18:48,360 --> 00:18:52,800
بيخليها تتلوّن أنّه البكتيريا بتعمل reduction للـ TTC

267
00:18:52,800 --> 00:18:57,100
بتحوّلها لحاجة اسمها Formazan وهذه اللي لونها أحمر

268
00:18:57,100 --> 00:19:02,400
فبالتالي and aids in distinguishing the food

269
00:19:02,400 --> 00:19:05,580
particles هتساعد إنّها تتميّز الـ food particles عن

270
00:19:05,580 --> 00:19:09,400
الـ colonies لكن قلنا المشكلة اللي بتواجهني colonies

271
00:19:09,400 --> 00:19:12,580
cannot be picked for isolation after this method

272
00:19:12,580 --> 00:19:15,600
has been used ما بقدر أستخدم الـ colonies هاي اللي

273
00:19:15,600 --> 00:19:21,120
تم معالجتها بالـ TTC لأنّها هتفقد بعض من خواصّها وما

274
00:19:21,120 --> 00:19:25,520
راح تعطيني نتائج صحيحة recording result طبعا هدول

275
00:19:25,520 --> 00:19:31,290
لما نرجع إن شاء الله على الجامعة هنعمل التقارير شو

276
00:19:31,290 --> 00:19:35,870
بعمل؟ لو أنا مستخدمة طبقين لكل تخفيف والاتنين في

277
00:19:35,870 --> 00:19:39,070
الـ incubator بروح أعدّ الـ colonies في الاتنين و باخد

278
00:19:39,070 --> 00:19:43,050
الـ average ليهم بعوض في القانون لو كان العدد

279
00:19:43,050 --> 00:19:46,370
واقع ضمن الـ range الـ concentration بيساوي N على S

280
00:19:46,370 --> 00:19:49,330
في دي الـ N هي الـ number of colonies الـ S هي الـ 

281
00:19:49,330 --> 00:19:51,970
الـ volume اللي اتت دي، لازم تكون بالمل و هو الـ volume 

282
00:19:51,970 --> 00:19:56,530
اللي أخدته من الـ tube و حطيته على الـ plate و الـ D هو

283
00:19:56,530 --> 00:19:58,970
الـ dilution الخاص بكل tube